La Citometría de Flujo es una técnica que permite el análisis multiparamétrico simultáneamente de propiedades biológicas y físicas de células de partículas, en un flujo que atraviesa al menos un laser. Los componentes celulares son marcados fluorescentemente y excitados por el láser, emitiendo intensidades de luz en varias longitudes de onda.

La fluorescencia puede ser medida determinando varias propiedades en partículas individuales, generalmente células, siendo posible el análisis de miles de partículas por segundo.

La plataforma de citometria se encarga del uso, mantenimiento y puesta a punto de los dos equipos con los que cuenta Biocruces. La plataforma también proporciona asesoramiento en la preparación de la muestra, análisis, diseño y puesta a punto experimental.

Servicios ofrecidos

  • Inmunofenotipajes celulares en ocho colores.
  • Ensayos de viabilidad celular.
  • Análisis de Apoptosis. Anexina V+7-AAD/IP.
  • Análisis de ciclo celular.
  • Medición de la función mitocondrial.
  • Expresión de proteínas fluorecentes. Medición de marcadores de transfección como GFP, YFP, CFP.
  • Ensayos de proliferación celular.
  • Análisis multiparamétrico de moléculas en soluciones líquidas. Citokinas bead array.
  • Análisis de propiedades celulares fisiológicas como estrés oxidativo, flujo de calcio y PH.
  • Determinación de la capacidad citotóxica de células NK.
  • Soporte técnico y científico sobre Citometría de Flujo.
  • Asistencia sobre metodología y diseño experimental.
  • Asesoramiento sobre adquisición y análisis de muestras.
  • Impartición de cursos de formación para usuarios a nivel básico.

Solicitud de servicios

Para más información y realizar las reservas, los interesados deberán ponerse en contacto con la plataforma a través del correo electrónico con: Miren Solaun Aguirre

 
 
Dra. Susana Larrucea
Investigadora Asesora
Miren Sorne Solaun Aguirre
Técnico
(0034) 94 600 6000 - Ext 2124
Formulario de contacto - Citometria
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Infraestructura

En la actualidad, el servicio posee la siguiente infraestructura:

La plataforma también cuenta con un Citómetro de Flujo MACSQuant®. Es un citómetro de flujo analizador equipado con 3 láseres de excitación de longitudes de onda como se describe a continuación:

  • 405nm. Láser Violeta (40mW)
  • 488nm. Láser azul (25mW)
  • 635nm. Láser rojo (20mW)
Cuenta con:
  • 2 Fotomultiplicadores para el Láser Violeta (450/50 y 525/50), donde se pueden recoger señales de Fluorocromos como el VioBlue™, Pacific Blue, Pacific Orange, CFP, BFP, DAPI, ALexaFluor405, DyeCycle Violet, BD HOrizon450, Cascade Blue, eFluo450 y Hoeschst.
  • 4 Fotomultiplicadores para el Láser Azul (525/50, 584/40, 655-730, 750LP) que permiten trabajar con: Fluoresceína (FITC), Ficoeritrina (PE), Ioduro de Propidio (PI), 7-Actinomicina D (7-AAD), PerCP, Alexa Fluor488, , CFSE,PE-Vio770, PE-Cy5.5, el PerCPCy5.5 y el PE-Cy7, así como proteínas fluorescentes tales como GFP, EGFP, EYFP.
  • 2 detectores para el láser Rojo (655-730 y 750LP) que permite trabajar adicionalmente con fluorocromos como el APC, APC-Vio770, Alexa Fluor647, eFluor660, APC-Cy7, APC-H7.
En resumen permite analizar simultáneamente 10 parámetros, 8 canales ópticos para la medida simultánea de señales fluorescentes, así como de dos PMT para los parámetros físicos proporcionales al tamaño (FSC) y a la complejidad celular (SSC).
Puede medir además el parámetro tiempo muy importante para poder realizar análisis cinéticos. Esta equipado con un soporte robotizado para racks de muestras (placas de 96, rack de 24 tubos), MACS Cooling Racks que permiten mantener las muestras a una temperatura entre 4-8 grados durante dos-tres horas y por una columna magnética complementaria que permite un enriquecimiento celular previo a la adquisición.
El software de análisis el MACS®Quantify Software (MQS), es instalable en cualquier ordenador que funcione bajo sistema operativo Microsoft®Windows®. El software permite el almacenamiento en un formato específico del citómetro (MQD) y la exportación de datos en 3 formatos diferentes: FCS 3.0, FCS 2.0 y FCS 3.1.

 

El citómetro analizador Beckman Coulter, modelo CYTOMICS FC500MPL, consta de un láser azul de argón de 488 nm y un láser diodo rojo que opera a 635 nm, y una serie de detectores que permiten el análisis de 7 parámetros, dos de dispersión (FSS y SSC) y 5 de fluorescencia recogidas en 5 fotomultiplicadores.

El citómetro FC500 presenta la siguiente configuración de filtros en cada fotomultiplicador:

  • FL1 (525BP), Recogiendo señales fluorescentes como FITC, GFP, Rodamina123.
  • FL2 (575BP), PE, CMTMR.
  • FL3 (620SP), IP, ECD.
  • FL4 (675BP), 7-ADD, PerCP, PerCP-Cy5.5, PC5, APC, TO-PRO3.
  • FL5 (755BP), PE-Cy7, APCH7.

El análisis de 5 colores se puede realizar usando un solo láser o los dos simultáneamente.

El sistema del FC500 está provisto de un sistema automático de adquisición permitiendo adquirir las muestras en baterías de 24 tubos.

El software del FC500, MXP almacena los datos en el formato LMD compatible con la mayoría de los programas de análisis de citometría de flujo que se pueden adquirir en el mercado.