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Citometría

Presentación

La citometría de flujo es una técnica que permite el análisis multiparamétrico simultáneamente de propiedades biológicas y físicas de células de partículas, en un flujo que atraviesa al menos un laser. Los componentes celulares son marcados fluorescentemente y excitados por el láser, emitiendo intensidades de luz en varias longitudes de onda.

La fluorescencia puede ser medida determinando varias propiedades en partículas individuales, generalmente células, siendo posible el análisis de miles de partículas por segundo.

La plataforma de citometria se encarga del uso, mantenimiento y puesta a punto de los dos equipos con los que cuenta Biocruces Bizkaia. La plataforma también proporciona asesoramiento en la preparación de la muestra, análisis, diseño y puesta a punto experimental.

Descripción general

FACSDiva: Software BD FACSDiva que permite la adquisición de datos en el LSR FortessaX20 y su posterior análisis de datos de forma manual o en batch, diagramas con posibilidad de escalas lineal, logarítmica y biexponencial y exportar datos (formato archivo FCS 2.0 y FCS 3.0) además de compensación off-line.

MACSQuantify: Software que trabaja bajo sistema operativo Windows con todas las funciones para representar datos con análisis de imágenes y estadística con posibilidad de análisis de datos durante la adquisición de muestras, agrupamiento de datos y generación de un único fichero.

FlowLogic: Programa de análisis de datos generados por cualquier citómetro de flujo. Ofrece diferentes plataformas de análisis que permiten realizar los análisis estándar con diferentes regiones que definen subpoblaciones y sus estadísticas.

Servicios

Servicios ofrecidos

  • Inmunofenotipajes celulares en ocho colores.
  • Ensayos de viabilidad celular.
  • Análisis de Apoptosis. Anexina V+7-AAD/IP.
  • Análisis de ciclo celular.
  • Medición de la función mitocondrial.
  • Expresión de proteínas fluorecentes. Medición de marcadores de transfección como GFP, YFP, CFP.
  • Ensayos de proliferación celular.
  • Análisis multiparamétrico de moléculas en soluciones líquidas. Citokinas bead array.
  • Análisis de propiedades celulares fisiológicas como estrés oxidativo, flujo de calcio y PH.
  • Determinación de la capacidad citotóxica de células NK.
  • Soporte técnico y científico sobre Citometría de Flujo.
  • Asistencia sobre metodología y diseño experimental.
  • Asesoramiento sobre adquisición y análisis de muestras.
  • Impartición de cursos de formación para usuarios a nivel básico.

Solicitud de servicios

Para más información y realizar las reservas, los interesados deberán ponerse en contacto con la plataforma a través del formulario web.

Infraestructuras

En la actualidad, el servicio posee la siguiente infraestructura:

Citometro analizador FORTESSA X20

El citómetro de Becton Dickinson, modelo Fortessa X20, está equipado con láser azul de (488nm, 50-mW,), láser rojo (633 nm, 100-mW) y láser violeta (405 nm, 50-mW).

Consta de dos detectores de parámetros morfológicos, (FSC y SSC) y 14 detectores de fluorescencias analizando para cada uno de ellos el área, altura y anchura del pulso.

Incorpora una óptica basada en la reflexión de la luz conducida por fibra óptica, desarrollada y patentado por BD (sistema de octágonos y trígonos con los PMTs acoplados a fibra óptica) para una mínima perdida de señal y conseguir la máxima sensibilidad.

Posee de un sistema automatizado de fluidos BD FACSFlow Supply System que asegura el suministro automatizado de fluidos del sistema y estabiliza la presión de fluidos en el citómetro.

Para análisis de resultados dispone de un software denominado FACSDiva.

El sistema incluye un módulo de calidad que permite optimizar voltajes y realizar un control y seguimiento del funcionamiento del sistema.

Citómetro MACSQuant de Miltenyi Biotec

La plataforma también cuenta con un Citómetro de Flujo MACSQuant®. Es un citómetro de flujo analizador equipado con 3 láseres de excitación de longitudes de onda como se describe a continuación:

  • 405nm. Láser Violeta (40mW)
  • 488nm. Láser azul (25mW)
  • 635nm. Láser rojo (20mW)

Cuenta con:

  • 2 Fotomultiplicadores para el Láser Violeta (450/50 y 525/50), donde se pueden recoger señales de Fluorocromos como el VioBlue™, Pacific Blue, Pacific Orange, CFP, BFP, DAPI, ALexaFluor405, DyeCycle Violet, BD HOrizon450, Cascade Blue, eFluo450 y Hoeschst.
  • 4 Fotomultiplicadores para el Láser Azul (525/50, 584/40, 655-730, 750LP) que permiten trabajar con: Fluoresceína (FITC), Ficoeritrina (PE), Ioduro de Propidio (PI), 7-Actinomicina D (7-AAD), PerCP, Alexa Fluor488, , CFSE,PE-Vio770, PE-Cy5.5, el PerCPCy5.5 y el PE-Cy7, así como proteínas fluorescentes tales como GFP, EGFP, EYFP.
  • 2 detectores para el láser Rojo (655-730 y 750LP) que permite trabajar adicionalmente con fluorocromos como el APC, APC-Vio770, Alexa Fluor647, eFluor660, APC-Cy7, APC-H7.

En resumen permite analizar simultáneamente 10 parámetros, 8 canales ópticos para la medida simultánea de señales fluorescentes, así como de dos PMT para los parámetros físicos proporcionales al tamaño (FSC) y a la complejidad celular (SSC).

Puede medir además el parámetro tiempo muy importante para poder realizar análisis cinéticos.

Esta equipado con un soporte robotizado para racks de muestras (placas de 96, rack de 24 tubos), MACS Cooling Racks que permiten mantener las muestras a una temperatura entre 4-8 grados durante dos-tres horas y por una columna magnética complementaria que permite un enriquecimiento celular previo a la adquisición.

El software de análisis el MACS®Quantify Software (MQS), es instalable en cualquier ordenador que funcione bajo sistema operativo Microsoft®Windows®. El software permite el almacenamiento en un formato específico del citómetro (MQD) y la exportación de datos en 3 formatos diferentes: FCS 3.0, FCS 2.0 y FCS 3.1.

Miembros de la plataforma

Tarifas

pdf Tarifas plataforma citometría. (Actualizadas enero 2020)

Formulario de contacto

Formulario de contacto - Citometría

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